下一步，南志标和李春杰团队将对新种质的性能进行进一步评估，并思考着将内生真菌人工接种转向小麦、玉米、水稻等禾谷类作物，逐步实现从饲用作物到粮食作物的转变。

中药材含有的化学成分复杂，影响其化学成分种类和含量的因素也很多，因此需要规范中药材的质量标准。2.2 供试品溶液的制备选用满山红叶100 g，采用回流法提取2回，第1回加入12倍水，放置30 min，回流提取30 min，过200目滤布，滤液备用。

如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系删除。除此之外实验用到的试剂为分析纯。昆山市超声仪器有限公司的KQ-250DE型医用数控超声波清洗器。对照品色谱图见图2，供试品色谱图见图3。由中国科学院长春应用化学研究所质谱中心皮子凤副研究员鉴定为兴安杜鹃Rhododendron dauricum L.叶。

结果显示所选药材中含有杜鹃素。药渣第2回加入10倍水，提取20 min，过200目滤布，合并2次滤液，减压浓缩至500 mL，冻干，取冻干粉0.1 g，加入20 mL水超声提取(功率100W，频率40 KHz)60 min，放至室温，摇匀，过0.45 m的微孔滤膜，即得。补骨脂提取物及从中分离得到的单体化合物具有多种药理活性，包括雌激素活性、抗肿瘤活性、抗氧化活性、抗菌活性、抗炎活性、抗抑郁活性、肝保护活性、成骨细胞活性和抗糖尿病作用等，具有很好的药用价值。

1H NMR (CDCl3, 500 MHz) H: 1.19 (3H, s, H-16), 1.62 (3H, s, H-14), 1.67 (3H, s, H-15), 5.02 (2H, m, H-18), 5.88 (1H, dd, J = 10.5, 17.5 Hz, H-17), 6.05 (1H, d, J = 16.5 Hz, H-8), 6.25 (1H, d, J = 16.5 Hz, H-7), 6.76 (2H, d, J = 8.5 Hz, H-3和H-5), 7.24 (2H, d, J = 8.5 Hz, H-2和H-6)。以上数据与文献对照一致，故鉴定化合物1为seputhecarpan A。近年来在抗糖尿病的研究中，蛋白质酪氨酸磷酸酶1B（protein tyrosine phosphatase 1B，PTP1B酶）可以调节许多与糖尿病重要靶点相关的细胞应答，对胰岛素信号转导进行负调节，是抗糖尿病研究的热点之一。2 实验方法2.1 提取与分离补骨脂（10kg）用95％乙醇室温浸提（每次60L，浸泡1周），浸提2次。

在室温下将化合物，阳性对照CC06240[20](10 )和酶预孵育5 min。利用多种色谱分离手段从补骨脂的95%乙醇提取物中得到了10个酚类化合物（图1），其中化合物1为首次从该植物中分离得到。

3 已知化合物1~10的化学结构鉴定化合物1:黄色粉末，根据高分辨质谱分子离子峰 m/z 323.1272 [M + H]+（计算值为323.1278）确定其分子式为C20H18O4。13C NMR (CDCl3, 100 MHz) C: 130.5 (C-1), 127.4 (C-2), 115.4 (C-3), 154.9 (C-4), 115.4 (C-5), 127.4 (C-6), 126.8 (C-7), 135.2 (C-8), 42.6 (C-9), 43.9 (C-10), 123.1 (C-11), 141.0 (C-12), 70.9 (C-13), 29.9 (C-14), 29.9 (C-15), 23.5 (C-16), 145.5 (C-17), 112.2 (C-18)。流分D38-D39通过反相液相色谱（92%的甲醇水溶液洗脱）进行纯化，得到化合物5（6mg）和化合物6（6mg）。结果 从补骨脂的95%乙醇提取物中分离鉴定10个化合物，它们分别是seputhecarpanA（1）、补骨脂酚（2）、13-羟基异补骨脂酚（3）、12-羟基异补骨脂酚（4）、二聚补骨脂酚A（5）、二聚补骨脂酚B（6）、二聚补骨脂酚C（7）、4,2-二羟基-4-甲氧基-5-（3,3-二甲基烯丙基）-查尔酮（8）、isobavachromene（9）、4-hydroxyisolonchocarpin（10）。

13C NMR (CDCl3, 100 MHz) C: 130.8 (C-1), 127.3 (C-2), 115.3 (C-3), 154.7 (C-4), 115.3 (C-5), 127.3 (C-6), 126.4 (C-7), 135.7 (C-8), 42.5 (C-9), 41.3 (C-10), 23.2 (C-11), 124.8 (C-12), 131.3 (C-13), 17.6 (C-14), 25.7 (C-15), 23.3 (C-16), 145.9 (C-17), 111.9 (C-18)。补骨脂（Psoralea corylifolia L.）又名：破故纸、婆固脂等，是豆科补骨脂属植物补骨脂的干燥成熟果实，主要产于云南西双版纳和四川金沙江流域，具有补肾壮阳、温脾止泻、纳气平喘的功效，临床用于白癜风和骨质疏松等疾病的治疗。使用带有两个泵（C-605），紫外线检测器（C-635）和ODS色谱柱（60600 mm，50 m，400 g。试剂pNPP用作测量PTP1B酶的活性的底物。

将流分A32-A53合并约60g，与MCI拌样，进行MCI柱色谱分离，用50%至100%的甲醇梯度洗脱，得到20个洗脱部分（B1-B20）。1 仪器与材料核磁共振光谱（NMR）是在BrukerAV-ш400、BrukerAV-ш500、VNS-600、Bruker AV-600光谱仪上，以TMS作为内标，在氘代氯仿（CDCl3）中运行的。

在终体积为100 L，含有50 mol/Lm HEPES，5 mol/LM DTT，150 mol/LM NaCl，2 mol/LM EDTA和2 mol/LM pNPP（pH 7.0）的活性系统中测量，在30 ℃孵育10 min，然后添加50 L 3mol/L NaOH。以上数据与文献对照一致，故鉴定化合物2为补骨脂酚。

补骨脂于2018年8月从中国河北省安国市购买。流分D22-D23通过反相液相色谱（87%的乙腈水溶液洗脱）进行纯化，得到化合物7（7mg）。1H NMR (CDCl3, 500 MHz) H: 1.77 (3H, s, H-6), 3.01 (1H, dd, J = 7.5, 15.0 Hz, Ha-3), 3.31 (1H, dd, J = 9.5, 15.0 Hz, Hb-3), 3.50 (1H, m, H-6a), 3.59 (1H, t, J = 10.5 Hz, Ha-6), 4.22 (1H, dd, J = 5.0, 10.5 Hz, Hb-6), 4.91 (1H, br s, Ha-5), 5.08 (1H, br s, Hb-5), 5.19 (1H, t, J = 8.5 Hz, H-2), 5.49 (1H, d, J = 6.5 Hz, Ha-11), 6.36 (1H, a, H-8), 6.36 (1H, a, H-4), 6.40 (1H, s, H-10), 7.07 (1H, d, J = 8.5 Hz, H-7), 7.27 (1H, s, H-1)。组分B13-B14合并约11.2g，用80%~95%的甲醇水溶液进行中压液相色谱的梯度洗脱，得到55个洗脱部分：D1-D55。化合物3:黄色油状物，根据高分辨质谱分子离子峰 m/z 295.1664 [M + Na]+（计算值为295.1669）确定其分子式为C18H24O2。13C NMR (CDCl3, 150 MHz) C: 126.4 (C-1), 120.8 (C-2), 161.2 (C-3), 98.3 (C-4), 156.1(C-4a), 66.6 (C-6), 39.4 (C-6a), 119.5 (C-6b), 126.4 (C-7), 107.5 (C-8), 160.7 (C-9), 98.3 (C-10), 156.8 (C-10a), 79.2 (C-11a), 112.2 (C-11b), 86.7 (C-2), 33.8 (C-3), 143.7 (C-4), 111.8 (C-5), 17.1 (C-6)。

流分C14通过反相液相色谱（73%的甲醇水溶液洗脱）进行纯化，得到化合物10（4mg）。化合物2:黄色晶体，根据高分辨质谱分子离子峰 m/z 257.1896 [M + H]+（计算值为257.1900）确定其分子式为C18H24O。

1H NMR (CDCl3, 500 MHz) H: 1.19 (3H, s, H-16), 1.70 (3H, s, H-14), 4.04 (1H, t, J = 6.5 Hz, H-12), 4.84 (1H, s, H-15), 4.94 (1H, s, H-15), 5.03 (2H, m, H-18), 5.86 (1H, dd, J = 10.5, 17.5 Hz, H-17), 6.03 (1H, d, J = 16.5 Hz, H-8), 6.25 (1H, d, J = 16.5 Hz, H-7), 6.77 (2H, d, J = 8.5 Hz, H-3和H-5), 7.24 (2H, d, J = 8.5 Hz, H-2和H-6)。然后，在405 nm的波长处测量吸光度。

并对化合物进行了体外PTP1B酶的抑制活性测试，结果显示，化合物2和7表现出PTP1B酶抑制作用。YMC）的Bchi系统进行MPLC实验。

乙醇提取物与硅胶拌样，通过硅胶柱色谱分离。硅胶（100-200目，200-300目，青岛青岛海洋化学有限公司），ODS（50 m，YMC，日本）和MCI（CHP 20/P 120，日本）用于柱色谱。结论 其中化合物1首次从该植物中分离得到。课题组前期研究发现多种天然酚类成分对PTP1B酶有良好的抑制活性，因此本研究对补骨脂的酚类成分展开研究，并通过PTP1B酶的抑制活性筛选活性化合物，为补骨脂的抗糖尿病研究提供物质基础。

以上数据与文献对照一致，故鉴定化合物4为12-羟基异补骨脂酚。流分C7通过反相液相色谱（47%的乙腈水溶液洗脱）进行纯化，得到化合物3（5mg）和化合物4（5mg）。

合并浸提液，过滤，回收乙醇得1350g提取物。使用Microsoft Excel软件计算IC50值，阳性对照的IC50值为0.77 mol/L。

2.2 PTP1B酶的抑制活性测试在hGST-PTP1B-BL21大肠杆菌中过表达的人GST-PTP1B酶基因重组蛋白，并通过GST亲和层析纯化。此外，TLC实验是在预涂硅胶GF254板上结合紫外线进行的。

通过蛋白质酪氨酸磷酸酶1B (PTP1B)酶抑制活性实验评价了化合物的活性，结果显示化合物2和7具有PTP1B酶的抑制活性。1H NMR (CDCl3, 500 MHz) H: 1.16 (3H, s, H-16), 1.30 (3H, s, H-14), 1.30 (3H, s, H-15), 5.02 (2H, m, H-18), 5.88 (1H, dd, J = 10.5, 17.5 Hz, H-17), 5.63 (2H, a, H-11, H-12), 6.05 (1H, d, J = 16.5 Hz, H-8), 6.24 (1H, d, J = 16.5 Hz, H-7), 6.77 (2H, d, J = 8.0 Hz, H-3和H-5), 7.23 (2H, d, J = 8.0 Hz, H-2和H-6)2.1.2 色谱柱的考察由于叶绿素a和叶绿素b的检测波长相近，为清楚考察色谱柱效果，选用波长445 nm检测叶黄素，645 nm检测叶绿素a和叶绿素b。方法的线性关系、精密度、稳定性以及平均加标回收率等各项方法学参数均表明，该方法的灵敏度和准确度均符合实际样品检测过程中的要求。

结果表明，试样的日内及日间精密度均低于5%，表明该方法的稳定性和重现性良好。3种色素均在0.05～50 mg/L范围内线性极佳（R2=0.9999）。

2.2 方法学考察2.2.1 标准曲线及定量限分别配制浓度为1.2.1所述的系列标准工作溶液，进样后以不同浓度的峰面积（平均值/10000）y为纵坐标，配制的标准品的质量浓度x（mg/L）为横坐标，建立y-x标准曲线，计算回归方程，结果如表1所示，根据信噪比S/N=3，测得各组分定量限和检出限结果见表1。本研究方法的建立为植物中重要色素的定量提供了可靠、快速、准确的高通量分析方法。

选用商品化的C18-AQ柱和氰基柱分别对待测样品进行分析，检测结果表明，在氰基柱上分离3种色素的保留时间较长，分离度较高，如图1所示，有利于叶绿素a、叶绿素b和叶黄素的定量检测。连续3 d每天重复检测试样，测定日间精密度，结果示于表3。